α2-antiplasmin (α2-antiplasmin, α2-AP) syntes och utsöndring av levern, som innehåller 452 aminosyror enkelkedjigt glykoprotein med en molekylvikt av 70000. α2-AP tillhör en familj av serin enzym inhibitor i human plasma α2-AP är en viktig hämmare av plasmin, spelar kontrollen fibrinolys en nyckelroll [1]. Denna beredning α2-AP monoklonal antikropp, ELISA-metod används för att fastställa övervakningen av det fibrinolytiska systemet, för att ytterligare förhöja immunogeniciteten hos antigener, vilket minskar mängden av antigen, antigenet förlängd frisättning tid, med en inert substans såsom makromolekyler nitrocellulosamembran ( NC membran) som antigen bärare bädda immun mjälte. Vi kommer adsorberas på NC membranantigen, vänster mus knuffar längs mittlinjen längsgående snitt under bröstet och tillbaka 1 cm långa, lager för lager Rufu, dra försiktigt i mjälten, mjälten till toppen längs den längsgående axeln på ett enhetligt ljus liten mun, in i en trianglar innehåller α2-AP NC membranantigen, gör det helt inbäddad i mjälten, var ingen blödning observerades efter back nöjd mjälte, följt av suturering såret. Efter intervallet 3 W, sedan använda samma metod 1, under de 3 första dagarna efter boosterimmunisering med mjältceller från musmyelomceller (5:1), med PEG-4000 sammansmälta konventionella metoder [2,3], HAT selektivt odlingsmedium, då klon växa till 1/10 hålstorlek, undersöks med indirekt ELISA hybridomantikropp utsöndrar cellinjer, och användningen av begränsade utspädning positiva hybridom subklonades på etablerade två utsöndrar anti -α2-AP monoklonal antikropp hybridomcellinje, heter 3H4 och 2E3, med α2-AP immunisering kaniner med användning av konventionella metoder för att framställa polyklonala anti-α2-AP antikroppsera. 3H4 som en studie av dess hybridom kromosom nummer var 96,37 ± 1,90, utsöndrade antikropp lgG1 underklass, kappa typ. Genom ELISA-titrar 1:106, med mättad ammoniumsulfatutfällning från ascites renade McAb 3H4, upptäcktes SDS-PAGE högre renhetsgrad. 3H4 antikroppar mot α2-AP standarder var positiva, medan ATIII och fibrinogen var negativa, vilket tyder på att dess ingen korsreaktioner. Denna hybridomcellinje 3 d passage 1, in vitro odling av sex månader eller mer, upptäcktes ELISA antikroppstiter ingen signifikant minskning. Detekterade med ELISA i normal human plasma α2-AP halten i det renade McAb 3H4 board paket, kanin-anti-α2-AP så mycket antikropp, pepparrotsperoxidas-konjugerat get-anti-kanin-IgG som tre anti-till ABTS som substrat. , ELISA-analys av 30 normal natriumcitrat antikoagulerande kanten plasma (01:09) α2-AP nivåer, resultatet är (98 ± 1,99) mg / L. Således, för framställning av α2-antiplasmin monoklonala antikroppar detekterar α2-AP, för förståelsen av leversjukdom, trombotiska sjukdomar, DIC, och många andra sjukdomar fibrinolys förändring har en bred tillämpning utsikter, kan trombolytisk behandling kan användas för att övervaka [ 1]
|
