Teknik definitioner
Kinesiska namn: proteinsekvensbestämning
Engelska namn: proteinsekvensbestämning
Definition: bestämning av aminosyrasekvensen av proteinmolekylen. För närvarande automatiserade proteinsekvenserare linjer från N-terminalen av peptidkedjan i en mätning.Applied Science: biokemi och molekylärbiologi (ett ämne), metoder och tekniker (två personer)
Ovanstående innehåll av National Science and Technology Approval kommitté meddelade
Koncept
För närvarande, den så kallade proteinsekvensering, i huvudsak avser bestämningen av den primära strukturen av proteinet. Den primära strukturen hos proteinet (primär struktur) består av proteiner, inklusive antalet polypeptidkedjor. Många tillfällen att använda peptider och proteiner kan likställas. Aminosyrasekvensen av polypeptidkedjan, är vilka grunden för protein biologisk funktion.
Bestämning av protein-aminosyrasekvens av proteinkemi forskning. Sedan 1953 F.Sanger bestämning av den primära strukturen av insulin eftersom vet nu omkring hundra tusen olika proteiner i en struktur.
Sekvensering krav
● 1 prov krävs ren (> 97%);
● 2 känna till molekylvikten hos proteinet;
● 3 vet att proteinet består av flera subenheter;
● 4 Bestämning av aminosyrasammansättning; molekylvikt beräknas enligt antalet av varje aminosyra.
● 5 Fastställande av mängden ammoniak hydrolys, amid beräknad.
Proteiner och aminosyrasekvensbestämning av peptider
● 1 och separation av peptiden isär kedjan
● 2 Bestämning av proteinmolekyler i antalet polypeptidkedjor
● 3 disulfidbindning brott
● 4 Bestämning av aminosyrakompositionen av varje polypeptidkedja, och beräkna den molekylära förhållandet av aminosyrasammansättning
● 5N slutet, C-terminal Beslutsamhet
● 6 polypeptid strängbrott
● 7 Bestämning av aminosyrasekvensen för varje peptid.
● 8 identifierade peptidsekvensen av polypeptidkedjan.
● 9 för att bestämma den ursprungliga placeringen av disulfidbindningar i polypeptidkedjan.
Syrahydrolys
● Common 6 mol / L saltsyra eller 4mol / L svavelsyra vid 105-110 ℃ hydrolysbetingelser, är reaktionstiden ca 20 timmar.
● Fördelen med denna metod är inte sannolikt att orsaka racemisering hydrolysat. Nackdel är kokande syra tryptofan är helt förstörd;
● hydroxylgrupp-innehållande aminosyror, såsom serin eller treonin, är en liten del nedbrutet, aspartat (aspartam) och glutamin amid sidokedjan amidgruppen hydrolyseras till en karboxylgrupp.
Alkalisk hydrolys
|