Språk :
SWEWE Medlem :Inloggning |Registrering
Sök
Encyclopedia gemenskap |Encyclopedia Svar |Submit fråga |Ordförråd Kunskap |Överför kunskap
Föregående 1 Nästa Välj Sidor

Jonbyteskromatografi

Jonbyteskromatografi (Jonbyteskromatografi förkortat IEC) är den jonbyte medlet som stationär fas, mobil fas komponenter baserade på jonbytesmedel med den reversibla jonbyte jämviktsbindning kraft skillnaden mellan storleken och separering en typ av kromatografi. 1

Utveckla

År 1848 studerade Thompson et al markens alkaliska ämnen som finns under jonbyte utbyte fenomen. 1940-talet, framväxten av en stabil växelkurs egenskaper utbyte polystyren jon hartser. 1950-talet, jonbyteskromatografi till området för biokemi analys av använda aminosyror. För närvarande jonbyteskromatografi är fortfarande ofta används inom området för biokemi som en kromatografisk metod, ofta används i olika biokemiska substanser, såsom aminosyror, protein, kolhydrater, nukleotider och andra separationsmetoder och rening. Ion används värmeväxlare är: jonbyte cellulosa, dextran jonbyte och jonbytarhartser.
Grundläggande information

Jonbyteskromatografi är matrisen gjord med en laddning eller en cellulosaharts. Benämnde en positivt laddad katjonbytarharts, medan benämnd en negativt laddad anjon harts. Jonbyteskromatografi kan också användas för proteinseparation och rening. Eftersom proteiner har isoelektrisk punkt när pH av proteinet i olika förhållanden är laddat tillstånd också olika. Anion-exchange matris med en negativ laddning av proteinet, så denna typ av protein som finns kvar i kolonnen, och sedan genom att öka saltkoncentrationen i eluatet åtgärder till protein adsorberat på kolonnen eluerades. Svagt bundna proteiner eluerades först. Omvänt katjonbytesmatris med en positiv laddning av proteinet, eluerades proteinbindningen genom gradvis ökning av saltkoncentrationen i eluatet eller öka pH av eluatet.

Särskild operation

Förbehandling och kolonnpackning

Användningen av jonbyte vatten för att tvätta bort en liten mängd cellulosa krossade fälls enkelt partiklar i syfte att garantera en bättre enhetlighet, för bra produkt inte är svullen av detta steg. Utbyte av svällningsmedel före användning utspädd syra eller alkali, vilket gör den till H eller OH-band utbyte av formulär. Anjonbytare används "alkali - acid - alkali" process, så att den slutliga sväng-OH-typ eller ett salt-typ värmeväxlare, katjonbytare används för "acid - alkali - acid" process, så att det sista sväng-H-typ värmeväxlare.

Tvättning cellulosan före användning god balans till önskat pH och jonstyrka. Ha en balanserad utbyte agent redan innan bubblorna kolonnpackningen bort under reducerat tryck. För att undvika partikelstorlek i området utbyte agent i den naturliga sättningar när stratifierad till det lämpliga tryck kolonnpackningen ske samtidigt som den kompaktering kolonnbädden, minskad dödvolym, bidrar till förbättrad upplösning.

Pelare installerade och därefter elueras med startbuffert tills den når hela saldot före användning.

Pipettering och eluering

Pipett:

Kromatografi Prover bör användas i samma start buffertlösning pH och jonstyrka, bör pH-värdet valt falla värmeväxlare och är en kombination av motsatt laddning sortiment, medan uppmärksamhet bör vara låg jonstyrka, kan dialys , gelfiltrering eller utspädning metod för att uppnå detta syfte. Den olösliga i provet ska vara före dialys eller gelfiltrering ta bort genom centrifugering. För att uppnå tillfredsställande separation, bör prowolymen vara lämpligt, att inte överskrida den lastkapacitet av kolonnen. Kolumn lastkapacitet kan användas för att beräkna utbyteskapacitet, oftast på utbyte medlet för utbyte av provvolym på 1% -5% av den totala.

Eluering:

Har kombinerats med provet före jonbyte, genom att förändra pH eller ändra jonstyrkan hos en eluerad konjugat, kan också ändra pH och jonstyrka. För att fullständigt separerade komponenterna i komplexet, behöver ofta gradvis ändra pH eller jonstyrka, är den enklaste metoden att iscensätta elueringsmetod, som kommer att graderas och jonstyrka vid olika pH tillsattes, så att de olika komponenterna gradvis elueras. Eftersom denna eluering av pH och joniska förändringar styrka, antalet komponenter i elueringsvolymen samtidigt en liknande eluering dålig renhet, lämpliga för fin separation. Det bästa sättet är en kontinuerlig gradienteluering eluering anordningen visad i figur 16 till 6 De två behållare på samma nivå, den första behållare fylld med en pH-buffert, en andra behållare som innehåller en hög saltkoncentration eller olika pH-buffertar, två kommunicerande kärl, är den första kolumnen är ansluten till behållaren och, när lösningen strömmar in i kolonnen från den första behållaren, den andra behållaren automatiskt lösning för att komplettera, genom att blanda lösningen fas med den första behållaren blandat flöde i kolonnen så att förmågan att tjäna gradienteluering buffert. Den första koncentrationen av behållaren finns tillgängliga när som helst beräknas med följande formel:

C = C2-(C2-C1) (1-V) A2/A1

Vari A1, A2 representerar tvärsnittsarean av två behållare: C1, C2, respektive koncentrationen av lösningen i behållaren, V är volymflödet förhållandet av den totala volymen. När A1 = A2 när linjär gradient, när A1> A2 när konkav lutning, A1> A2 när konvex lutning.

Eluering bör uppfylla följande krav:

① elutionsvolymen skall vara tillräckligt stor, i allmänhet ett par gånger bäddvolymen, så att separationen av topparna inte kommer vara alltför trångt.

② maximal lutning är tillräckligt hög för att möjliggöra tätt adsorberade material kan elueras.

③ gradienter inte stiger för snabbt, gör bara att du vill flytta zonen når slutet av kolonnen i kommande desorption staten. Desorption av målföreningen förtid, vilket diffusionszon, medan den önskade produkten var för sent att göra desorption toppform för bred.

Analys av fraktionerna eluerade med en volym (5-10ml / rör) samlas eluatet mättes genom röret för att erhålla ett kromatogram. Enligt de olika experimentella syften, kan vara en lämplig detektionsmetod (bestämning av biologisk aktivitet, immunologiska analyser, etc.) för att bestämma positionen mönster i den önskade produkten, och utvinning av den önskade produkten.

Regenerering av jonbytare är jonbytare och bevarandet av kolonnen kan regenereras. Såsom jonbyte cellulosa tillgänglig 2 mol /: NaCl eluering kolumnen, om den är tillgänglig 0.1mol/LNaOH stark adsorbat tvättning av kolonnen, om fettlösliga ämnen finns tillgängliga nonjonisk detergent tvättkolonn regenerering, kan även tvättas med etanol , i storleksordningen: 0.5mol/LNaOH- vatten - etanol - vatten -20% NaOH-vatten. Spara jonbyte agent för att lägga till konserveringsmedel. På anjonbytaren föredras 0,002% klorhexidin (klorhexidin), etyl katjonbytare används timerosal (0,005%). Vissa produkter är skapade med 0,02% natriumazid.

Tillämpning

Jonbyteskromatografi teknik har använts i stor utsträckning inom olika ämnesområden. I biokemi och klinisk biokemi används huvudsakligen för separation av aminosyror, peptider och proteiner, kan också användas för att separera nukleinsyror, nukleotider och andra laddade biomolekyler.


Föregående 1 Nästa Välj Sidor
Användare Omdöme
Inga kommentarer
Jag vill kommentera [Besökare (44.201.*.*) | Inloggning ]

Språk :
| Kontrollera kod :


Sök

版权申明 | 隐私权政策 | Copyright @2018 World uppslagsverk kunskap