| Språk : |
|
| Encyclopedia gemenskap |Encyclopedia Svar |Submit fråga |Ordförråd Kunskap |Överför kunskap |
Vätskekromatografi |
 |
|
Produkt: iquid Kromatografi med användning av vätskeblandningen - skillnaden mellan förhållandet mellan de två icke biandbara vätskor eller fasta ämnen fördelningen, blandningen isolerades först och sedan analyseras för att identifiera instrumentet. Kort introduktion Enligt stationär fas vätskekromatografi flytande eller fast, är uppdelad i vätska - vätskekromatografi (LLC) och vätska - fast kromatografi (LSC). Part of modern high-vätskekromatografi av infusionspumpen, insprutningssystem, temperaturkontrollsystem, kolonner, detektorer, signalinspelningssystem. Och organ för jämförelse av den klassisk vätska kolonnkromatografi, hög effektivitet, snabb, känslig och så vidare.Hög kokpunkt, en blandning av föreningar svår gas genom kolonnen och elueringsmedlet och för att uppnå separation. Används i biokemi, biomedicinsk, miljökemi, petrokemi-och andra sektorer. Fungerar System av reservoaren, pump, injektor, kolonn, detektor, inspelare, etc. flera delar. Reservoir trycket hos den mobila fasen pumpas in i systemet, flyter provlösningen genom injektorn in i fasen, den mobila fasen laddades kolonnen (stationär fas), är provlösningen beror i två faser som har komponenterna olika distributionskoefficienterna, den relativa rörelsen i båda faserna, efter upprepad adsorption - desorption process fördelning, varvid komponenterna har en större skillnad i hastighet, den separeras i individuella komponenter successivt från kolonnutflödet , genom detektorn provet koncentrationen omvandlas till en elektrisk signal till inspelningsenheten, är data som skrivs ut i form av HPLC-spektra huvudinsprutningssystem, infusionssystemet, separationssystem, system för upptäckt, och databehandlingssystem kommer att vara beskrivs i deras respektive sammansättning och egenskaper. Injektionssystem Generellt använder membran injektion injektor eller högtrycksinjektion in i operationssalen för att slutföra provinjektionsvolymen är konstant. Detta kommer att förbättra reproducerbarheten för analys av prover är bra. Infusionssystem Systemet innefattar en högtryckspump, reservoaren och den mobila fasen gradiometer tre delar. Vanligtvis är trycket hos högtryckspumpen liter. 47 ~ 4.4X10Pa, justerbar flödeshastighet och stabila, när den mobila fasen genom kolonnen tryck kan diffusionseffekter minskas i kolonnen av provet, vilket kan accelerera rörelsehastigheten i kolonnen, resolutionen, för att förbättra återvinningen av provet bibehålla den biologiska aktiviteten av proverna är bra. Mobil fas reservoar och gradiometer kan flöda skötare karaktären av den stationära fasen och prov förändringar, däribland förändringar i polaritet eluenten, jonstyrka, pH-värde, eller använd en kompetitiv hämmare eller denatureringsmedel. Detta medger att en mängd olika ämnen (även om endast en grupp eller skillnaden isomerer) effektiv separation kan erhållas. Separationssystem Systemet innefattar en kolonn, såsom en termostat, och anslutningsröret. Kolumn längd är i allmänhet 10 ~ 50 cm (två om nödvändigt tillsammans, kan tillsättas i anslutningsröret mellan de två), en innerdiameter på 2 ~ 5 mm, tillverkad av ett material "tjockväggigt glasrör av rostfritt stål eller en titanlegering eller liknande levande byggd med 5 ~ 10 um partikelstorlek av den stationära fasen (bestående av matris och stationär fas) i diameter. Matrisen är den stationära fasen av en hög mekanisk hållfasthet eller silikonhartskomposition, vilken har en inert (t ex kiseldioxid-ytan för det primära genen kiselsyran har avlägsnats), porös (porstorlek upp till 1000?) Och ett stort specifika egenskaper yta, kombinerat med mekaniskt yta belagd (med gaskromatografi ställdes med samma stationära fas), eller genom kemisk koppling av olika gener (t ex en fosforsyragrupp, en kvaternär amin-grupp, en hydroximetyl-grupp, en fenylgrupp, en aminogrupp eller en kolkedja av olika längder alkylgrupp, etc), eller organisk ligand. Därför är en sådan anordning fäst i förhållande till den typ av material med god selektivitet. Exempelvis kan ytan av det porösa kiseldioxid kopplings ärtlektin (PSA), fibroblasterna kan sättas i ett glykoprotein isolerades. Dessutom, den stationära fasen baserad plasmid liten kolonn säng lätt uppnå jämn, tät tillstånd, kan lätt minska virvel diffusionseffekter. Matrix storlek är liten, ytliga porer, är por provmassöverföringszonen kort. Dessa band med smal bredd för att förbättra upplösningen är fördelaktig. Enligt kolumn effektivitet teoretisk analys, är liten matrispartikelstorlek, är antalet teoretiska nivåer N större. Detta är också ytterligare ett bevis på liten partikelmatris kommer att förbättra upplösningen av sanningen. Vidare kan termostaten HPLC från rumstemperatur till 60 ° C, genom att förbättra massöverföringshastigheten, förkorta analystiden, kan öka effektiviteten av kolonnen. Tillämpning HPLC kräver bara kan göras en provlösning, utan att begränsa urvalet flyktiga brett utbud av val av mobil fas, stationär fas mängd olika typer, som kan separeras termiskt instabila och icke-flyktiga, dissocierade och och icke-dissocierade molekylviktsområde av olika substanser. Samarbetar med prov förbehandling, HPLC uppnått hög upplösning och hög känslighet, medan separation och bestämning av materialets natur mycket nära som möjligt, kan komplexet separeras från kroppen på den mindre fas-komponenten. Med utvecklingen av den stationära fasen, är det möjligt att bibehålla den fulla aktiviteten av biokemiska ämnen HPLC-separationsbetingelser för att avsluta dess biokemiska analyser för att lösa problem blivit den mest lovande strategi. Eftersom HPLC med hög upplösning, hög känslighet, hög hastighet, kan kolonnen upprepad användning, lätt att samla utflödet komponenten, etc, som allmänt tillämpas på biokemi, livsmedelsanalys, forskning olika medicinska områden, miljöanalys, oorganisk analys. . Högpresterande vätskekromatografi kopplat med strukturinstrumentet är en viktig riktning. Vätskekromatografi - masspektrometri teknik i samband lockade universell uppmärksamhet, till exempel analys av karbamat bekämpningsmedel och polycykliska kolväten, etc, vätskekromatografi - infraröd spektroskopi tillsammans också utvecklas snabbt som i analysen av miljöföroreningar mäta kolväten i vatten, icke-flyktiga havsvatten kolväten, gör miljöanalys föroreningar ny utveckling. Installation 1, vätskepelaren strukturen: [1] a, tom kolumn från kolumn leder, kolumn rör och filterenheten. Kolumn fogar med låg dödvolym strukturen, är kolonnen kontaktdonet gängad vid båda ändarna av komponenterna, en ände är 7/16 tum utvändig gänga, vars andra ände är 3/16 tum gänga (och utomlands har normaliserats). 7/16 inches och en yttre gänga / 4 tum slang (Φ6.35mm) anslutningar för att täta en mellan krossning plats. 3/16 tum invändig gänga på 1/16 tum (Φ1.57mm) som förbinder rörkopplingen är tryckringen placerad att täta skarven kolonnen. För att minimera dödvolym utanför kolumnen kolumnen under installationen, använd Φ1.57mm anslutningsröret förs in genom den ihåliga skruven till slut att försöka tryck efter ringen, och sedan dra åt den ihåliga skruven. Ringen pressas omedelbart efter strängsprutning av den ihåliga skruven i anslutningsröret krage (genom anslutningsröret av tryckringen är exponerad på längden av röret bör vara strikt kontrollerad eller annan fast storlek 2,5 mm lång). Kontakter i båda ändar av kolonnen i kolumnen röret placeras i vardera änden av en rostfri filter (eller filter) för kolumn packning inte blockera ut utanför kolumnen och mobil fas förlust. Komponenterna är tom kolumn # 316 rostfritt stål, tål den allmänna lösningsmedelseffekten. Men på grund av dess lösningsmedels innehåller klorider har viss frätande, så var uppmärksam vid användning av sådana lösningsmedel kan inte stanna kvar länge i kolumnen och anslutningsröret för att förhindra korrosion. b, kolumn packning: rollen av vätskepelaren separeras mellan spackel och den mobila fasen, är pelarna i klassificeringen bygger på den typ av filler. Normal fas kolonn: Fler kiselgel som kolumn packning. Enligt formen kan delas in i två typer av amorfa och boll i intervallet 3 till 10 um i partikeldiameter. En annan positiv fas fyllmedel är bundna till kiseldioxidytan-CN,-NH2 funktionella grupper, såsom den så kallade bunden fas kiseldioxid. Omvänd fas-kolonn: silikamatris främst på dess yta funktionella grupper bundna oktadecyl (ODS) opolära filler. Även om de stereotyper och boll typ av poäng. Andra vanliga omvändfas-packning bunden också C8, C4, C2, fenyl och liknande, som har en partikeldiameter av 3-10 ^ m däremellan. 2, installation av kolonnen: en, vilken typ av öppen låda kolonn kolonnen erkänd, storlek, tillverkningsdatum och lagras i kolumnen lösningsmedel. b, skruvade tätnings kontaktdon i båda ändar i kolumnen tillbaka i rutan för säkerhetskopiering. c, beroende på kolonnröret märkt mobil fas flöde, inloppsänden av kolonnen genom anslutningsröret och utlopp ansluten till insprutningsventilen (Om förhållandena tillåter, rekommenderar vi att använda en skyddskolonn före kolumn), export och detektorkolonnanslutningar. Yttre diameter på anslutningsröret är 1.57mm, en innerdiameter av 0,1-0,3 mm rör av rostfritt stål. Anslut båda ändarna av det ihåliga röret med en tryckskruv och tätningsringen. Vid övertagandet ska försöka minska extra kolumn död volym. Anslutningsröret genom den ihåliga skruven insatt ordentligt som möjligt efter tryckringen i slutet, och sedan dra åt den ihåliga skruven medurs till stopp dra åt, dra åt med en skiftnyckel fortsätter 1/4-1/2 cirkel medsols, kom ihåg att inte använda överdrivet våld. Eftersom den mobila fasen genom kolonnen trycket har läckage fenomen, fortsätt med nyckeln medurs för att dra åt 1/4 varv tills inget läckage så långt. Felsökning Bubblor bräddavlopp Det finns bubblor, stäng av pumpen, öppna avtappningsventilen, öppna Purg nycklar, städning avgasning av mobila fasen, bubblar ständigt ur filtret in i den mobila fasen, antingen öppna rensknappen några gånger, kan de inte ta bort bubblorna kontinuerligt genereras. Anledningen till det långsiktiga filtret är nedsänkt i en buffert, såsom ammoniumacetat, den inre filter på grund av mögeltillväxt och reproduktion av den bakteriella massa bildas, blockering av filtret är det svårt att smidigt passera genom filtret bufferten, lufttrycket i pumpen genom filtret in mobil fas. Processing filter indränkt i 5% salpetersyra, några minuter av ultraljud rengöring, filter kan läggas i blöt i en 5%-ig salpetersyra lösning för 12 till 36 timmar, skakas försiktigt flera gånger och sedan tvättas med rent vatten flera gånger för filter Öppna övertrycksventilen, öppna rensknapp rengöringsavgasning, eftersom det fortfarande finns bubblor fortsätter att växa fram ur filtret, fortsätter filtret indränkt i 5% salpetersyra, om det inte finns några luftbubblor fortsätter att växa fram ur filtret, filterbeskrivning interna formbakterier har förstörts nitratgrupp, kan den mobila fasen smidigt passera genom filtret. Öppning av avlastningsventilen öppnar pumpades flödeshastigheten justerades till 1,0 ~ 3.0ml/min, filtret sköljs med rent vatten under ca 1 timme. Du kan rengöra filtret. Stäng övertrycksventilen, ren metanol tvätta en halvtimme. Högtryckskolonnen ⑴ som buffertsalt (ammonium-acetat, etc) avsattes på kolonnen; ⑵ provkontaminering avsättning. I det första fallet är den första behandling med vatten av 40 ~ 50 ℃, körhastigheten tvättning av kolonnen, kolonnen tryck som skall minskas, en motsvarande ökning av flödeshastigheten för tvättning, kolonntrycket sjunka avsevärt, sköljdes med vatten vid rumstemperatur, följt av ren metanol, tvättades kolonnen 30 minuter, det andra fallet var kontamination provet som orsakas av avlagringen av C18-kolonn och kolonnen tvättades med rent vatten, bakåt, till metanol tvätt, följt av tvättning av kolonnen med metanol isopropanol (4 6), i metanol och därefter vatten, sköljdes sedan med rent vatten, metanol och slutligen sköljning av kolonnen tvättades under 30 minuter eller framåt. Ingen indikation ⑴ pumppackningsslitage; ⑵ massa bubblor in i pumpen. I den första processen, utbyte av packningen; det andra fallet den pumpande effekt, medan en injektionsspruta 50 ml glas vid utloppet av pumpen för att dra luft. Instabil Kategori :[Kromatografi term] |
| Användare Omdöme |
|
Inga kommentarer |
