| Språk : |
|
| Encyclopedia gemenskap |Encyclopedia Svar |Submit fråga |Ordförråd Kunskap |Överför kunskap |
Kapillärelektrofores |
 |
|
Kapillärelektrofores: baserad på smält kiseldioxid kapillär till separationskanalen till högspänningslikströmsfält som drivkraft, baserat på skillnaden mellan rörlighet och distribution beteendet hos varje komponent på elektroforetisk separation av prov-och analysmetoder för att uppnå separation. Kapillärelektrofores Utrustningen Huvudkomponenter är 0 ~ 30kV justerbar stabiliserad strömförsörjning, inre diameter som är mindre än 100 pm (vanligtvis 50 ~ 75 pm), är längden i allmänhet 30 ~ 100cm kvarts kapillär elektrod tank, detektorn och injektorn enhet. Detektorn har en UV / Vis-detektor, laser-inducerad fluorescens detektorn och elektrokemisk detektor, den förstnämnda är vanligast. Elektrisk injektion metod metod (elektromigration), tryckmetod (övertryck, undertryck) och sifon metod. Ett kit kommer med automatisk spolning, kontroll autosampler temperatur, datainsamling och bearbetning av komponenter.Ett kvarts kapillärelektrofores kapillär, pH-värde> 3, den inre ytan av den negativt laddade, det elektriska dubbelskiktet bildas i kontakt med buffertlösningen i högspännings elektriska fältet, bildandet av buffertskiktet sidan på grund av den elektriska dubbel positivt flyttar till den negativa riktningen, varigenom bildas en elektrisk flöde. Under tiden, i en buffertlösning, de laddade partiklar i det elektriska fältet, att de har olika hastighet i motsatt polaritet till laddningen av dess riktning, bildas elektrofores. Laddad partikelmigrationshastighet i kapillär elektroforesbuffert och lika med vektorsumman av det elektroosmotiska flödet. Eftersom laddningen av olika antal partiklar, massa, volym och form på grund av olika faktorer, såsom typ av migreringshastigheten för separation uppnås. Kapillärelektrofores separeringstillstånd Den vanligaste modellen för att analysera laddade lösta ämnen. Prover av varje komponent på grund av de olika rörligheter och delas in i olika zoner. För att minska strömflödet och adsorptions-fenomen kan modifieras kemiskt för att göra det kapillära väggen. Kapillär-gelelektrofores, kapillär in i monomer, polymerisationsinitiator för bildning av en gel, i första hand för bestämning av proteiner, DNA och andra makromolekylära föreningar. Polymerlösningen eller liknande, och en annan substans som har en siktningseffekt, såsom dextran, polyetenoxid, i en kapillär för analys, varvid nämnda kapillärelektrofores icke-gel-siktning, så detta läge är ibland kallas kapillär såll av elektroforesgeler och under icke-gel siktning i två kategorier. Micellär elektrokinetisk kapillärkromatografi, gå med i buffert joniska ytaktiva medel, såsom natriumlaurylsulfat, bildandet av miceller är fördelningen separerade ämnen sker mellan den vattenhaltiga fasen och micellär fas (kvasi-stationär fas) och med elektricitet migrationsflödet i kapillärerna, för att uppnå separation. Detta läge kan användas för att separera neutrala substans. Affinity kapillärelektrofores, kapillärväggen beläggning eller gå med i gel affinitetsligander med olika affinitet för att uppnå separationsändamål. Kapillär elektrokromatografi, fylls i HPLC stationär fas kapillär eller kapillärväggen beläggning stationär fas, mobil fas kraftflödet drivkraft för den kromatografiska processen, detta läge både elektrofores och mekanismen för vätskekromatografi separation. Kapillär isoelektrisk fokusering uppnås genom att täcka innerväggarna för att minimera elektriska flödet, sedan blanda provet och amfolyter injektion, respektive, efter de två elektrodcellen med syra och alkali, högspänning, etablerad inom kapillär pH gradient av transport av lösta ämnen i kapillären till respektive isoelektriska punkter, för bildning av en klar zon, trycket eller en förändring i fokus värdesdetektor pH-elektrod terminalen av det lösta ämnet reservoartanken genom detektorn. Isotakofores använda elektrolyter och efterföljande pilot elektrolyt löst ämne i olika grad beroende på deras elektroforetisk separation händelse. Ovanför läge CZE, CGE, mece tre ansökningar mer. Allmänna krav på instrument Det instrument som används för den kapillära elektroforesinstrument. Om det organ som bestämdes genom kapillärelektrofores arter, mäta dess definierade parametrar, förutom att analysläge, detektionsmetoden (t.ex. UV-absorption eller fluorescens detektor våglängd av den pålagda potentialen elektrokemisk detektor, etc.) bör ske i enlighet med införsel av arten de förutbestämda, andra parametrar, såsom storleken på den kapillära innerdiameter, längd, buffert, pH, koncentration, mängd modifierare, driftspänning eller ström, varaktigheten av driften är temperaturen för kapillären, etc., kan hänvisa till monografin Enligt bestämmelserna i datan, enligt resultaten av de straffprocessuella villkor och instrument som används, och göra nödvändiga justeringar. Elektrod och lösning i de kapillära spåren till en buffert, kan ett organiskt lösningsmedel tillsättas som ett modifieringsmedel och ett ytaktivt medel, som kallas löpbufferten. Rinnande buffert bör avgasas före användning. Elektrofore spektrum rusningstid för varje komponent, sade migrations tid. Micellär elektrokinetisk kapillärkromatografi micellär motsvarande vätskekromatografi stationär fas, men det är med EOF migration inom kapillär, är kapacitetsfaktorn oändlig med micellsammansättning småningom utflöde. Andra parametrar är desamma som används i vätskekromatografi. Detektion Metoder Kapillärelektrofores detektions används ofta i absorptionsspektroskopi, fluorescensspektroskopi, termisk mikroskopi, Raman-spektroskopi, mass-spektroskopi och elektrokemiska metoder. Hastighet kapillärelektrofores (CE) separationssystem Effektiv höghastighetschip kapillärelektrofores (CE) separationssystem Tekniken utvecklas snabbt under de senaste åren, separation och analys av proteiner, deoxiribonukleinsyra (DNA) och andra biologiska makromolekyler uppvisade betydande fördelar. Det tidiga 1990-talet, Manz och Widmer och andra först föreslogs i MEMS-teknik (mikroelektromekaniska system, MEMS), och analytisk kemi-baserade mikro totala analyssystem (miniatyriserade totala analyssystem, MTA) koncept. För närvarande, med en fördjupning och utveckling av proteome forskning, hur man ska uppnå en snabb och effektiv separation av proteiner har blivit en viktig fråga som måste lösas. Den on-chip för proteinseparation med kapillärelektrofores analys kan avsevärt förbättra hastigheten och separationseffektivitet, därför har denna forskning rönt stor uppmärksamhet, har många tidningar publicerats. Mikroflödes kapillär elektrofores chip funktioner Microchip kapillärelektrofores kapillär elektrofores konventionella operationer på chipet, användningen av glas, kvarts eller olika polymera material bearbetning micron kanal, högtrycks likström elektriskt fält som drivkraft, provinjektion, separation och detektion. Det är principiellt konventionell kapillärelektrofores separation är densamma, och har därför en fördel i termer av separation av biologiska makromolekyler prover. Dessutom, jämfört med den konventionella kapillärelektroforessystem har spånavskiljning kapillärelektroforessystem också en kort tid, är hög separationseffektivitet, system liten och lätt att uppnå fördelarna med integration av olika operativa enheterna. Ovanstående fördelar kapillärelektrofores chip är ett av de viktigaste medlen för separation och analys av proteiner. Rodriguez, etc. har uppkommit på en konventionell kapillär, kapillär och korta glaschips till zon elektrofores separeringstillstånd av humant immunoglobulin G (IgG) och fluoresceinisotiocyanat (FITC) separation av reaktionsblandningen till Jämförelse av tre typer av separationsprestanda hos systemet. Vid användning av effektiva längd 35 am och en lång effektiv längd av kapillären 06:00 kort kapillär, separationstiden var 335 S och 84 S, respektive antalet teoretiska bottnar 27750 och 41816. När den verkliga sträckan på endast 2,8 cm glaschip separation tid reduceras till 15 S, det teoretiska platt antalet 49-000. Det kan ses med hjälp av en glas kapillärzonelektrofores chip på separationshastigheten och kolonneffektivitet var signifikant överlägsen konventionell kapillärelektrofores-system. Mikroflödessystem chip kapillärelektrofores proteinmönster För närvarande litteraturen chip kapillärelektrofores separation av proteiner används huvudsakligen zonelektrofores, gelelektrofores, isoelektrisk fokusering, micellär elektrokinetisk kromatografi och tvådimensionella elektroforesmönster. Chip kapillärzonelektrofores Kapillärzonelektrofores mikrochip kapillärelektrofores separation av proteiner är en fundamental separeringsläget. Det är baserat på de olika migrationshastigheter på olika proteinmolekyler i ett elektriskt fält separation uppnås är en enkel, snabb separation. Använda zonelektrofores separationsläget har framgångsrikt isolerat en mängd olika proteinprover. Colyer såsom kapillärelektrofores marker att zonelektrofores mönster av humana serumproteinprover separerade proteinerna kan skilja mellan fyra zoner (dvs., IgG, transferrin, a-1-antitrypsin och albumin zonen, serumproteinprover användes i simuleringen 7, p, dl albumin zon). Vilket fluorescerande proteiner efter separation utförs, på grund av den fluorescerande färg TNS (2-toluidinonaphtha.1-en-5-sulfonat) markerar lägre känslighet av serumproteiner, så jag inte egentligen uppnå fem områden av humant serum protein prover med separation . Xiao et med användning av zonelektrofores i 50 mmoVL fosfatbuffert (pH 2,15) som arbetsbuffert, bredden på 30um polydimetylsiloxan (PDMS) spånkanal realiseras i 35S cytokrom C och lysozym snabb separation. Dodge och annan utformning integrerad åtta mikroventiler och en mikropump PDMS chip via mikro-ventil mikropump för att uppnå en effektiv kontroll av vätskeflödet. De använde första separationszonen elektroforesseparationen läge bovinserumalbumin och myoglobin, och därefter proteinkomponenterna infördes efter separationen av enzymet genom inverkan av mikro-blandningsventil, den sista av produkten analyserades genom masspektrometri. Detta arbete visar chip-teknologi kan användas för förbehandling före mass analys av komplexa proteinprover spektrometri. Zhuang kvartschips i 75 mmol / L boratbuffert (pH 10,3) som chipelektroforesbuffertsystemet, separation av immunglobulin, O / -1 antitrypsin, transferrin och bovint serumalbumin protein och analyserades genom elektrofores kliniskt diagnostiserade graviditetshypertoni, reumatisk hjärtsjukdom, urinprover från patienter med multipelt myelom, inom 2 min var i överensstämmelse med US Helena elektrofores systemanalys. En viktig fråga i studien av protein-chip kapillärelektrofores i kanalen som skall lösas är problemet med ytadsorption av proteinmakromolekyler. Liten adsorption effekt av protein och den inre kanalväggen av chip kommer att minska separationseffektiviteten Q proteiner, vilket orsakar deformation bred svanstopp, på separations reproducerbarhet. I kapillärzonelektrofores separeringstillstånd med, den allmänna användningen av den inre väggen av kanalen och buffert permanent modifierade dynamiskt modifierande tillsatser finns två sätt att hämma proteinadsorption. |
| Användare Omdöme |
|
Inga kommentarer |
